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mtt法檢測細(xì)胞毒性

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　　一些研究人員甚至將 MTT 檢測與流式細(xì)胞術(shù) (FACS)結(jié)合使用，以從非活細(xì)胞中分選活細(xì)胞。然而，這種情況并不常見，并且有更好的 FACS 染色劑，例如碘化丙啶 (PI)。
 
　　細(xì)胞效價藍(lán)、臺盼藍(lán)和 ATP 檢測
 
　　如上所述，MTT 測定實際上是一種代謝測定，因為 MTT 分子需要進(jìn)入細(xì)胞并使用 NADPH 轉(zhuǎn)化為甲臜。雖然 MTT 新陳代謝的確切機(jī)制尚不清楚，但這意味著線粒體需要完好無損并發(fā)揮作用。所以，如果你添加一種會降低線粒體效率的細(xì)胞毒性物質(zhì)，你可能會得到奇怪的結(jié)果。在這種情況下，了解其他活/死檢測也很有用。研究中使用的其他主要細(xì)胞活力測定包括：
 
　　細(xì)胞滴度藍(lán)：與 MTT 測定類似，該測定涉及將細(xì)胞與刃天青（藍(lán)色）一起孵育，并在細(xì)胞代謝后形成試鹵靈（粉紅色）。通常代謝需要 1-4 小時，但它比 MTT 檢測靈敏得多，因為您可以通過熒光 (Ex/Em 560 nm/590 nm) 測量產(chǎn)物。這種檢測的主要優(yōu)點是您不需要在 DMF/SDS 中重新溶解產(chǎn)品，因此它更簡單。這也是一個很好的高通量檢測！
 
　　臺盼藍(lán)排除法：如果您沒有分光光度計，那么將臺盼藍(lán)染色法與顯微鏡一起使用很簡單。因為臺盼藍(lán)是一種帶電染料，它不能透過活細(xì)胞。因此，只需用臺盼藍(lán)孵育細(xì)胞并在顯微鏡下觀察，您就可以直觀地確定活細(xì)胞的數(shù)量（未標(biāo)記）、非活細(xì)胞的數(shù)量（藍(lán)色）和受損細(xì)胞的數(shù)量（略帶藍(lán)色）。計算不同視野中的單元格數(shù)量，您就完成了！活力只是活細(xì)胞除以細(xì)胞總數(shù)的比率。這種方法的缺點是您只測試細(xì)胞的膜完整性。你不知道這些細(xì)胞是真的無法存活還是只是受到了一點點損壞。
 
　　ATP 測定：當(dāng)細(xì)胞無法存活時，它們不能再制造 ATP，而有活力和快樂的細(xì)胞可以制造 ATP。此外，一旦細(xì)胞死亡，ATP酶就會迅速分解ATP。使用這些信息，很容易看出為什么基于 ATP 的分析會非常有效。理論很簡單——裂解細(xì)胞，阻止 ATP 酶水解 ATP，加入螢光素酶和螢光素。您將獲得數(shù)小時的出色發(fā)光信號！
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